MMGM(Minerals Modified Glutamate Medium) Base + Sodium Glutamate - CM0607

 조성(Typical Formulation)

조제 (Directions)

건조 배지의 안정성을 위해서 sodium glutamate는 별도 용기로 공급되며 사용시 첨가해준다.

2배 강도 조제:

1리터의 정제수에 5.0g의 ammonium chloride(별도 구매)를 녹인다. 여기에 22.7g의 Minerals Modified Medium Base와 12.7g의 Sodium glutamate를 첨가하고 혼합하여 완전히 녹인다. 116°C에서 10분간 오토클레이브하여 멸균한다; 또는 3일 연속으로 100°C에서 30분간 열을 가한다.

1배 강도 조제:

1리터의 정제수에 2.5g의 ammonium chloride(별도 구매)를 녹인다. 여기에 11.4g의 Minerals Modified Medium Base와 6.4g의 Sodium glutamate를 첨가하고 혼합하여 완전히 녹인다. 116°C에서 10분간 오토클레이브하여 멸균한다; 또는 3일 연속으로 100°C에서 30분간 열을 가한다.

최종 배지의 pH는 최적 성능을 위해서 중요하므로 멸균 후 사용전에 pH6.7인지 확인해야 한다.

가열 공정에서의 차이로 인해 최종 pH 값에서 차이가 초래된다. 필요하다면 가열 공정을 조절하여 멸균 후에 최종 pH가 6.7이 되도록 해야 한다¹.

사용(Technique)

다중 시험관 법, 희석법 또는 최확수법(MPN)을 사용한다. 막여과법과 다중 시험관법을 비교한 실험에 의하면 glutamate medium은 물에서 대장균 미생물을 계수하는데 막을 사용하는 것이 만족스럽지 않았다¹¹.

좋은 수질의 물의 경우 배지는 1개의 50ml 부피와 5개의 10ml 부피로 접종되어야 한다. 조금 오염된 의심이 있는 물의 경우, 5개의 1ml 부피가 50ml 및 10ml 부피에 추가되어 사용되어야 한다. 오염된 물의 경우 1ml 부피를 희석해야 하며 50ml 부피는 시험에 제외될 수 있다.

더 큰 부피의 물(10ml 및 50ml)은 동량의 2배강도 배지를 사용하지만 1ml 부피 (또는 그 희석액)은 5ml의 1배강도 배지를 사용한다.

시험관을 35°C에서 배양하고 18-24시간 후에 평가한다. 산(노란색)과 Durham튜브에서 기체를 보이는 모든 시험관을 추정 양성으로 간주해야 한다. 시험관을 탭핑하여 기체가 나타나는 것도 포함한다. 남은 시험관은 재배양하고 24시간 후에 시험한다. 양성으로 간주되는 추가 배양 시험관은 추정 양성으로 간주한다.

각 추정 양성 시험관은 Brilliant Green Bile (2%) Broth (CM0031)에 계대배양하고 44°C에서 24시간동안 배양한다.

동시에 인돌생성 시험을 위해 1% Tryptone Water (CM0087) 시험관에 접종하여 44°C에서 24시간 배양한다.

44°C에서 lactose로부터 기체 생성과 44°C에서 인돌 생성은 영국에서는 E. coli의 증거로 인정된다.

염소처리수 검체에서 추정 양성 시험관은 기체를 생성하는 호기성 또는 혐기성의 포자생성 생물로 인해 위양성 결과를 배제하기 위한 시험이 필요하다. Brilliant Green Bile (2%) Broth에 계대배양을 실시하고 35°C에서 48시간동안 배양한다. 48시간내 기체 생성은 대장균군이 존재한다는 충분한 증거로 사용될 수 있다. 이 시험관을 MacConkey Agar (CM0007)에 동시에 계대배양하면 집락 모양으로 추가 구분을 쉽게 할 수 있다.

다중 실험실 연구 결과 Lauryl Tryptose Mannitol Broth가 E. coli의 단일 시험관 확정 시험에서 효율적이다는 것이 증명되었다¹².

미생물의 최확수는 HMSO Report 71의 부록 C의 표로부터 계산될 수 있다¹.

식품에서 Escherichia coli를 계수하기 위한 변형 직접 평판법

식품에서 Escherichia coli의 신속 계수를 위한 직접 평판법(DPM)이 보고되었다¹³. 이 방법은 Minerals Modified Glutamate Agar를 이용하는 회복 방법에 의해 변형되었다¹⁴. 이 변형법에서 리터당 15g의 한천이 Minerals Modified Glutamate Broth CM0607에 첨가된다. 이 회복방법을 이용하여 저자들은 냉동, 건조, 열처리, 또는 낮은 pH의 식품들에서 손상된 세포들을 회수할 수 있었다.

 저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지: 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용.

조제배지: 2-8°C에 보관

성상 (Appearance)

분말배지 : 연보라색의 유동성 분말

조제배지 : 보라색의 용액

 품질관리(Quality Control)

주의사항(Precautions)

추정 양성 시험관은 Lauryl Tryptose Mannitol Broth CM0831에 계대하고 44°C에서 배양해서 이 온도에서 인돌생성이 검출된 후에 Escherichia coli의 동정이 완료될 수 있다. 

설명(Description)

Glutamic acid에 기반하는 화학적으로 정의된 배지는 물에서 세균의 대장균군 그룹의 계수에 대해서 Folpmers²에 의해 처음으로 주창되었다.

Public Health Laboratory Service (PHLS)³의 시험결과 glucose를 포함하는 glutamic acid 배지는 48시간만에 너무 많은 위양성을 나타내었다. Gray⁴는 lactose를 포함하는 glutamate 배지를 변형하였고 나중에는 향상된 Formate Lactose Glutamate Medium에 대한 조성을 발표하였다⁵.

후자의 배지는 PHLS가 수행한 다른 대규모 시험에 포함되었다. 이 시험에서 glutamate 배지를 Teepol Broth (Jameson & Emberly⁷) 및 MacConkey Broth와 비교하였다. 시험결과 Gray의 향상된 formate lactose glutamate 배지는 기타 glutamate 배지보다 더 우수한 것으로 나타났다.

그 보고서는 배지의 무기물 함량에 대한 비판을 제기했으며 무기물의 양을 변경함으로써 개선 될 수 있음이 고려되었다

Metropolitan Water Board Laboratories와 Oxoid간의 협동 조사에 의하면 Minerals Modified Glutamate Medium (CM0289)에 결론이 도달하였다.

옥소이드의 Minerals Modified Glutamate Medium은 PHLS⁶의 추가 시험에 사용되었고 그 결과는 이전에 보고된 glutamate 배지의 우수한 성능을 확인시켜주었다.

MacConkey Broth보다 우수한 Mineral Modified Glutamate Medium (MMGM)의 성능은 Escherichia coli의 검출이 향상된 것에 주로 기인한다. PHLS⁸로부터 인용한 표는 시험에서 얻어진 결과를 나타낸다.

염소처리한 물의 경우 glutamate medium의 우수성을 증명하기 위해서 18시간 이상의 배양시간이 필요하다.

배지 및 방법은 The Microbiology of Drinking Water 2002에 기술되어 있다¹.

최근의 추가 시도에 의하면 MMGM이 염소처리수, 특히 미생물의 수가 적은 것으로 생각되는 경우, 에서 E. coli를 검출하는데 선택될 수 있는 배지로 밝혀졌다.

비록 Lauryl Tryptose Lactose Broth(LTLB)가 더 빠른 결과를 나타내지만(MMGM의 경우 48시간이 소요되는 데 비해 이 배지는 18~24시간만 소요), 기타 물에서 E. coli의 소량을 검출하는데 MMGM이 LTLB보다 더 좋은 것으로 알려졌다.

Papadakis¹⁰는 해수에서 E. coli의 분리를 연구하여 MMGM이 MacConkey Broth보다 더 좋다는 것을 발견하였다.  그러나 액체배지의 고 염농도를 피하기 위해 10ml의 1배 강도 MMGM에 1ml의 해수만 사용할 것을 권장하였다. 더 많은 부피의 해수도 1/10으로 MMGM에 희석해야 한다.