조성
| 성분* | gm/litre |
| Pancreatic digest of casein | 10.0 |
| Meat extract | 5.0 |
| Sodium pyruvate | 10.0 |
| Yeast extract | 1.0 |
| Glycine | 12.0 |
| Lithium chloride | 5.0 |
| Agar | 20.0 |
| pH 7.2 ± 0.2 @ 25ºC | |
| *성능표준을 위해 조절될 수 있음 | |
조제법
6.3g을 90ml 정제수에 현탁하고 끓여서 완전히 녹인다. 121ºC에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다. 48ºC로 식힌 후 재구성한 1 vial의 SR0122A(RPF Supplement)를 첨가한다. 잘 혼합한 후 plate에 붓는다.
설명
Staphylococcus aureus는 식중독을 유발할 수 있는 장독소(enterotoxin)를 생성하는 그람 양성의 구균이다. 이 세균은 많은 식품에 소량으로 존재하며 여러 단계에서 검사가 이루어지지 않으면 고도의 열저항성 장독소를 생성한다. 이 균이 lecithinase 와 lipase를 생성하는 것으로 여러 해 동안 알려져 왔고, 난황 배지에서 이 효소들을 검출하는 방법은 이 미생물의 동정법으로 폭넓게 사용되게 되었다.이 균의 coagulase 생성능은 기본 배지에 토끼 혈장을 첨가하여 확정적 진단을 가능하게 해준다.
토끼 혈장 피브리노겐(RPF) 한천 배지는 Beckers 등1에 의한 조성에 기반한다. 이 배지는 Baird-Parker 배지의 변경 형태이며 식품 및 기타 검체에서 Staphylococcus aureus의 선택적 분리, 계수, 확인에 권장된다2. RPF Agar의 조성은 손상된 세포를 회생시키기 위해 특별히 조성된 Baird-Parker Base를 유지한다3. 다른 점은 난황 에멀젼이 피브리노겐, 토끼 혈장 및 트립신 억제제로 대체되었다. 피브리노겐은 RPF agar에서 coagulase 반응을 향상시키기 위해 첨가하였다4. 토끼 혈장은 다른 혈장 원료와 비교하여 coagulase 활성이 더 특이적인 것으로 밝혀졌다. 트립신 억제제는 피브린분해(fibrinolysis)를 방지하기 위해 첨가되었다.
RPF 첨가제(SR0122)는 원래 조성에서 한 가지 관점에서 변경되어 potassium tellurite 함량이 0.01%에서 0.0025%(w/v)로 4배 감소되었다. 그 이유는 Oxoid 실험실에서 Staphylococcus aureus 일부 균주가 0.01%에서 potassium tellurite에 대해 민감한 것으로 밝혀졌기 때문이다5. 이 조성의 RPF agar는 Barid-Parker 배지 (CM0275 및 SR0054)에서 보다 좋은 성장 및 선택성을 보여준다. 이러한 향상된 생산성은 다른 실험실에서도 확인되었다6,7. Potassium tellurite 함량 감소로 인해 Staphylococcus aureus 균주는 흰색, 회색 또는 흑색의 집락들을 형성하며 불투명 침전환(즉, coagulase 반응)에 의해 둘러싸여 나타난다.
사용법
표면 접종 방법
1. 조제법에 따라 RPF Agar를 준비한다.
2. 권장되는 검체 크기 및 희석용액을 이용하여 식품 검체를 stomacher 또는 Waring blender에서 처리한다.
3. 준비된 검체 0.1ml 및 그 10배 연속 희석검체 0.1ml을 각각 평판배지에 접종한다.
4. 35ºC에서 배양하고 24시간 및 48시간후에 관찰한다.
5. 불투명 침전환이 있는 모든 집락을 계수한다. 검정색 집락에만 한정하지 않는다.
6. 식품 그람당 분리된 coagulase 양성 staphylococcus의 수를 보고한다.
붓기 평판법
1. 조제법에 따라 RPF agar를 조제하고 48 ºC를 유지한다.
2. 권장되는 검체 크기 및 희석용액을 이용하여 식품 검체를 stomacher 또는 Waring blender에서 처리한다.
3. 각각의 멸균 페트리접시에 준비된 검체(초기 현탁액 및 10배 희석된 검체) 1ml을 각각 첨가한다.
4. RPF Agar 20ml을 무균적으로 첨가하여 붓기 평판을 만든다.
5. 35ºC에서 배양하고 24시간 및 48시간후에 관찰한다.
6. 불투명 침전환이 있는 모든 집락을 계수한다.
7. 식품 그람당 분리된 coagulase 양성 staphylococcus의 수를 보고한다.
주의사항
Baird-Parker Agar Base (RPF) CM0961는 RPF Supplement SR0122와 함께 사용해야 한다.
Coagulase 양성 집락에 가깝게 자라는 일부 오염된 미생물의 집락들이 coagulase 환 반응을 부분적으로 분해시킬 수도 있다.