Listeria Enrichment Broth Base (UVM formulation) - CM0863

조성(Typical Formulation)

조제 (Directions)

Listeria Primary Selective Enrichment Supplement (UVM I)(SR0142)을 첨가할 경우:

27.2g의 CM0863을 500ml 정제수에 현탁하고121°C에서 15분간 오토클레이브로 멸균한다. 50°C로 식힌 후, 설명서에 따라 재구성한 1바이알의 SR0142를 무균적으로 첨가한다. 잘 혼합 후 멸균된 용기에 분주한다.

Listeria Secondary Selective Enrichment Supplement (UVM II) (SR0143)을 첨가할 경우:

27.2g의 CM0863을 500ml 정제수에 현탁하고121°C에서 15분간 오토클레이브로 멸균한다. 50°C로 식힌 후, 설명서에 따라 재구성한 1바이알의 SR0143을 무균적으로 첨가한다. 잘 혼합 후 멸균된 용기에 분주한다.

설명(Description)

Listeria Selective Enrichment Medium(UVM formulations)은 Donnelly 및 Baigent¹가 기술한 원래 조성과 1차 선택증균배지 및 2차 선택증균배지에서 nalidixic acid 농도를 감소시키고 2차 선택증균배지에서 acriflavine hydrochloride 농도를 증가시킨 변경 조성²에 기반한다.

이러한 변경 조성 및 2단계 선택 증균법의 개발로 인해 육류 제품에서 Listeria monocytogenes의 검출률 증가와 실험시간이 3~4일만 걸리는 장점이 실현되었다.

UVM Broth는 열 손상을 받은 Listeria monocytogenes의 회복을 위한 1차 증균 액체배지로 권장되고있다³.

DNA 탐침법에 UVM Broth를 사용할 때는 주의가 필요하다. 이 배지의 높은 염농도로 인해 검출에 억제효과가 나타날 수 있기 때문이다⁴.

저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지 : 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용

조제배지 : 2-8°C에서 차광하여 보관한다.

성상 (Appearance)

분말배지 : 짚색의 유동성 분말

조제배지 : 짚색의 용액

품질관리(Quality Control)

주의사항(Precautions)

액체 배양액은 평판상의 집락보다 더 위험하다.

조제된 배지는 차광하여 보관해야 한다. Acriflavine이 광산화되어 Listeria에 억제성 화합물을 형성할 수 있다.

Listeria Selective Medium(Oxford)(CM0856+SR0140)의 주의사항을 참조한다. 

사용(Technique)

1차 증균(Primary Enrichment)

1.    225ml의 Listeria Primary Selective Enrichment 배지(UVM I)에 25g 또는 25ml의 검체를 첨가한다.

2.    30°C에서 Stomacher bag에 준비된 검체를 배양한다.

3.    이 bag으로부터 다음의 과정을 수행한다: 4시간 배양 후에, Listeria Selective Agar 평판(참조1)에 0.2ml을 스프레딩한다.

24시간 배양 후에,

(i)    10ml의 Listeria Secondary Enrichment Medium (UVM II)에 0.1ml을 옮기고

(ii)   4.5ml의 KOH 용액(참조2)에 1ml을 옮긴다. 볼텍스 혼합을 한 뒤 1분내로 Listeria Selective Agar 평판에 이 혼합물을 계대배양한다..

2차 증균 (Secondary Enrichment)

4.    접종된 Listeria Secondary Selective Enrichment Broth (UVM II)를 30°C에서 배양한다. 3(i)를 참조.

5.    24시간 배양한 후,

(i) Listeria Selective Agar 평판에 0.2ml을 스프레딩한다.

(ii)     4.5ml KOH 용액(참조2)에 1ml을 옮긴다. 볼텍스 혼합을 한 뒤 1분 내로 Listeria Selective Agar 평판에 이 혼합물을 계대배양한다.

참조1 : USDA 법²에서 권장하는 Listeria Selective Agar는 LPM plating medium³이다. 하지만 Oxoid 실험실 연구⁵에 의하면 유사한 결과가 Listeria Selective Medium(Oxford formulation) (CM0856+SR0140)으로 가능한 것으로 나타났다. 갱신된 USDA법⁶에 의하면, LPM medium이 Modified Oxford Medium(MOX)으로 대체되었다. 평판에 plating하기 전에, 증균된 배양액을 Potassium hydroxide(KOH)로 처리해야할 필요성이 더 이상 없어졌다.

참조2 : KOH용액 조제 : 2.5g의 KOH 및 20g의 NaCl을 1리터의 정제수에 녹인다. 121°C에서 오토클레이브하여 멸균한다. 사용 전에 pH가 12이상이어야 한다.