조성
| 성분* | gm/litre |
| Peptone | 10.0 |
| Sodium Chloride | 20.0 |
| pH 8.6 ± 0.2 @ 25ºC | |
| *성능표준을 위해 조절될 수 있음 | |
조제
1리터의 정제수에 30g을 넣고 잘 섞는다. 최종 용기에 분주하고 121℃에서 15분간 고압습열멸균을 한다.
설명
Alkaline Peptone Water(CM1028)은 식품, 물, 임상검체로부터 Vibrio cholera 및 Vibrio 종들의 증균을 위한 것이다. 이 액체 배지는 hanging drop 방법을 이용한 검체의 직접 현미경 시험에도 사용될 수 있다.
Alkaline Peptone Water는 Aeromonas spp.의 배양을 위한 비선택적 증균 액체 배지로써 사용하기 위해 Shread, Donovan 및 Lee1에 의해 처음 조성되었다. Cruickshank의 보고에 의하면 pH가 증가되었을 때 이 배지를 Vibrio 종들을 효과적으로 배양하는데사용가능하다2. 이 배지에 포함된 2%(w/v) sodium chloride는 Vibrio cholerae 의 성장을 촉진하는 반면 이 배지의 염기성으로 인해 대부분의 원치않는 배경 균총은 억제된다.
사용
환경, 식품, 임상검체에서 Vibrio 종들의 분리하는 다양한 방법이 있다. 일반적으로 전 증균 단계와 고체 배지 도말, 그리고 형태학적,생화학적 및 혈청학적 동정을 거친다. 많고 다양한 증균 배지들이 보고되었지만 오직 Alkaline Peptone Water만이 폭 넓은 인정을 받고있다. (조성 및 정확한 방법에 대해서는 적절한 안내지침 및 표준을 참조하도록 한다.)
임상 검체
스왑 검체를 Alkaline Peptone Water에 직접 접종한다. 스왑에서 직접 배양을 하지 않을 경우, 멸균 미생물학적 루프를 사용하여 배지에 접종할 수 도 있다. 분변 검체의 경우 약 1g의 검체를 무균적으로 배지에 접종하고 잘 혼합한다. 접종된 액체 배지를 일반적으로 35-37℃에서 5-6시간 또는 18-20℃에서 18-20시간 배양한다3.
식품 및 물 검체
APHA4,5, FDA-BAM6, 그리고 ISO7 같은 적절한 표준을 참고한다.
모든 경우에 도말된 배지는 밤샘 배양한 후 전형적인 집락을 관찰한다:
1. Sodium Dodecyl Sulphate(SDS) Polymixin B Sucrose Medium |
Vibrio cholerae 및 Vibrio alginolyticus 같은 Sucrose 양성 vibrio들은 노란색을 보인다. Vibrio parahaemolyticus 및 Vibrio vulnificus 같은 Sucrose 음성 종들은 파란-녹색 집락을 보인다. 또한 Vibrio vulnificus 같은 sulphatase 생성 균들은 일반적으로 침전 환에 의해 둘러싸인다. |
2. Cholera Medium TCBS (CM0333) |
Vibrio cholerae 및 Vibrio alginolyticus 같은 sucrose 양성균들은 노란색을 보인다. Vibrio parahaemolyticus 및 Vibrio vulnificus 같은 Sucrose 음성 종들은 파란-녹색 집락을 보인다. |
3. MacConkey Agar (CM0007) |
lactose 음성 Vibrio 종들은 무색 집락을 보인다. |
생화학적 확정시험: Vibrio spp.는 oxidase 양성이며 glucose를 발효하여 산을 생성한다. oxidase 시험은 탄수화물이 포함된 배지(예. TCBS)에서 위음성결과를 초래하므로 시험전에 nutrient agar 또는 blood agar로 계대배양을 하도록 한다.