Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base - CM0739

조성(Typical Formulation)

조제 (Directions)

CCDA Selective Supplement (SR0155)를 첨가할 경우:

500ml의 정제수 22.75g의 agar base를 현탁하고 끓여서 완전히 녹인다. 121°C에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다. 50°C로 식힌 후 설명서에 따라 재구성된 1바이알의 SR0155를 첨가한다. 잘 혼합한 후 무균 페트리 접시에 붓는다. (Modified CCDA Medium)

CAT Selective Supplement (SR0174)를 첨가할 경우:

500ml의 정제수 22.75g의 agar base를 현탁하고 끓여서 완전히 녹인다. 121°C에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다. 50°C로 식힌 후 설명서에 따라 재구성된 1바이알의 SR0174를 첨가한다. 잘 혼합한 후 무균 페트리 접시에 붓는다. (CAT Medium)

사용(Technique)

Modified CCDA Medium의 경우

1.    조제법에 따라 Campylobacter Blood-Free Selective Agar를 조제한다.

2.    약0.5g의 검체를 5ml의 멸균 0.1% peptone water에 균질화하여 10배 희석한다.

3.    단일의 분리된 집락을 얻기 위해 면봉 스왑으로 조제한 선택 배지에 접종한다.

4.    평판을 약 5-6%산소, 10% 이산화탄소, 84-85% 질소의 대기조건 (CampyGen CN0025또는 CN0035사용)에서 37°C에서 48시간 동안 배양한다.

Campylobacter의 집락 모양이 종 수준까지 동정을 위한 가이드라인으로 사용될 수 있다. Campylobacter jejuni 균주는 회색의 습하고 평평한 퍼진 집락을 만든다. 일부 균주들은 녹색 색조나 건조한 모습, 금속성 광택이 있거나 없는 모습을 보여준다. Campylobacter coli 균주는 크림색 회색, 습하고, 약간 융기된 집락을 보여주는 경향이 있고 종종 뚜렷한 집락을 만든다.

집락은 임상 검체에서 처음에 분리되면 떼를 형성하는(swarm) 경향이 있다.

CAT Medium의 경우, 배양은 비호기적 조건에서 37°C에서 48-72시간동안 배양한다.

설명(Description)

Modified CCDA Medium은 Bolton 등¹의 기술한 원래 조성에 기반한다. 이 조성에는 혈액이 charcoal, ferrous sulphate, sodium pyruvate로 대체되었다. 원래 조성의 cephazolin을 cefoperazone으로 대체하여 선택성을 향상시켰다². 최근 연구에 의하면 평판을 42°C가 아닌 37°C에서 배양하면 분리율이 더 상승한다고 한다³.

Amphotericin B는 37°C에서 성장이 가능한 효모 및 사상균같은 오염균의 성장을 억제하기 위해 첨가된다.

Modified CCDA Medium 및 Campy-BAP Medium은 호열성인 campylobacters의 검출을 위한 신속 colony-lift 방법(한천 배양체에 막을 블로팅한 후 면역분석을 수행)에서 성능면에서는 동일하다⁵.

Campylobacter 종6의 보균에 대한 건강한 강아지 및 고양이 실험에서, modified CCDA medium이 적당한 배지이며 Campylobacter upsaliensis의 경우에 CAT medium 보다 더 생산적이다는 것이 밝혀졌다. Modified CCDA Medium은 비 임상 검체에서 Exeter broth에서 증균 후에 Campylobacter spp.의 분리에 적합합이 확인되었다⁷.

영국 MAFF(는 식품에서 Campylobacter의 분리를 위한 검증된 방법에서 Campylobacter Blood-Free Medium의 사용할 것을 지정하였다⁴.

CAT Medium

Campylobacter upsaliensis가 다양한 항생제들에 민감하기 때문에 선택 배지를 이용하여 분변에서 이 미생물을 분리하는 것은 지금까지 어렵웠다. 권장되는 분리 방법은 비 선택성 배지에서 막 여과 방법을 사용하는 것이다. 이 방법은 10⁵ CFU/g이하가 포함된 분변에서 좋은 회수율을 보여주지 못하며¹³, 상대적으로 느리며 기술이 필요한 방법이다.

CAT 첨가제 SR0174는 Aspinall 등¹⁴에 의해 기술된 조성에 기반한다. Charcoal이 포함된 Blood-Free Campylobacter Agar Base에 첨가하면 호열성 Campylobacter spp.의 분리가 좋아진다. CAT 첨가제는 다른 campylobacter 첨가제들에 비해 cefoperazone이 적게 포함되어 있기 때문에 Campylobacter upsaliensis의 분리가 선택배지상에서 가능하다. CAT는 enterococci를 제외하고 대부분의 Enterobacteriaceae를 억제한다. Teicoplanin은 enterococci를 억제하기 위해 사용된다. Amphotericin B는 항균제로써 첨가된다.

추가 연구에 의해 Campylobacter upsaliensis를 포함한 호열성 campylobacters의 선택적 분리를 위해 막 여과 배양법에 대한 대체 방법으로서 CAT Medium의 효과성이 확인되었다¹⁵.

Atabay, Corry 그리고 On¹⁶는 CAT Medium을 이용하여 소의 분변에서 이전에 보고되지 않은 catalase-음성, urease-양성 Campylobacter를 분리하였다. 이 미생물은 Blood-free Campylobacter medium(CCDA Medium)에서는 배양되지 않았다.

CAT medium, blood-free media 그리고 반고형 배지의 생산성을 비교한 연구에서 비 선택성 혈액 한천배지상의 막 여과법과 병행하여 CAT medium을 사용한 경우 아주 많은 수의 Campylobacter 및 Arcobacter 종들의  회복이 가능한 가장 생산성있는 방법이었다¹⁷.

저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지: 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용

CCDA 첨가제 SR0155: 2~8°C에서 차광 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용.

조제배지 Modified CCDA Medium: 2-8°C에서 최대 2주까지 보관.

CAT 첨가제 SR0174 : 2~8°C에서 차광 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용.

성상 (Appearance)

분말배지 : 검정색의 유동성 분말

조제배지 : 검정색 젤

품질관리(Quality Control)