Rappaport-Vassiliadis (RV) Enrichment Broth - CM0669

조성(Typical Formulation)

조제 (Directions)

상기 조성에 표기된 양은 고전적으로 표기된 것으로 1110ml의 배지를 조제한다. 과학 문헌과 일치시키기 위해 옥소이드에서는 위와 같이 표기한다.

1리터의 정제수에 30g(리터당 건조 배지 상당량)을 첨가하고 천천히 가열하여 완전히 녹인다. 스크류 마개 병 또는 시험관으로 10ml씩 분주하고 115°C에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다. 

사용(Technique)

식품 및 환경 검체

1.   제품설명서에 따라 225ml의 Buffered Peptone Water (CM0509) 또는 Buffered Peptone Water(ISO) (CM1049)을 용기에 준비한다.

2.   조제법에 따라 RV Broth를 준비한다.

3.   225ml의 Buffered Peptone Water에 25g의 시료를 넣고 35°C에서 16~20시간 동안 배양한다.

4.   0.1ml의 전-증균 배양액을 10ml의 RV Broth에 접종하고 42 ± 1°C에서 24~48시간 동안 배양한다²*.

5.   X.L.D. Agar (CM0469)와 추가 다른 평판에 같이 스트리킹을하여 액체배양액을 계대배양한다. 35°C에서 18~24시간동안 배양한다.

6.   전형적인 Salmonella 집락 모양을 보이는 집락을 생화학적 또는 혈청학적 시험으로 확정해야한다.

2* 권장되는 배양 온도는 43°C이지만 이것은 상한값이다. 배양기의 온도 변동을 감안하여 42 ± 1°C가 권장되며 항온수조의 경우도 42 ± 1°C이다.

정확한 사용법을 위해 표준 방법을 참조하라.

주의사항 (Precautions)

이 배지는 매우 흡습성이므로 습기로부터 보호해야 한다.

RV Broth는 Salmonella typhi가 의심되는 경우는 사용하지 말아야 한다.

제품 라벨에 표시된 전통적 조성과 무수물 형태의 magnesium chloride를 사용하는 리터당 축소된 중량 사이에 차이가 있음에 유의한다.

설명(Description)

Rappaport-Vassiliadis(RV) Enrichment Broth는 van Schothorst 및 Renaud¹가 기술한 조성에 기반하며, 식품 및 환경 검체에서 Salmonella 종을 분리할 때 선택적 증균 배지로서 권장된다. 또한 전-증균 없이 사람 분변에서 Salmonella를 분리하는데 사용될 수도 있다. 다만, 이 경우는 접종량은 작아야 한다. Rappaport 등²에 의해 기술된 원래 조성은 다른 Enterobacteriaceae대비 Salmonella 종들의 4가지 특징을 활용하기 위해 특이적으로 개발되었다.

1.    상대적으로 높은 삼투압에서의 생존력

2.    상대적으로 낮은 pH값에서의 증식력

3.    Malachite green에 대해 상대적으로 더 저항성이 있음

4.    상대적으로 영양 요구성이 낮음

옥소이드의 RV 증균 액체 배지는 Vassiliadis 등³이 기술한 것과 유사하지만 사용된 peptone이 soya peptone인 것이 다르다. Soya peptone을 사용할 경우 salmonellae의 성장이 향상된다는 보고가 있다^1,11.

Rappaport Broth는 Salmonella typhi를 제외한 Salmonellae의 증균의 경우 Selenite Enrichment Broth 및 Tetrathionate Broth 보다 더 뛰어난 것으로 알려져 있다². Vassiliadis 등³은 Rappaport Broth를 변형하여 malachite green의 농도를 내리고 배양 온도를 43°C까지 올렸다. 이 변형된 Rappaport Enrichment Broth는 RV 또는 Rappaport-Vassiliadis Medium이라고 하며 다른 salmonella 선택 증균 배지보다 우수한 것으로 알려져 있다. 전-증균 배지의 접종량이 작을 경우 특히 그렇다^4,5,6,7,8.

해수에서 Salmonella의 분리를 위한 다양한 증균 배지들의 평가에서, RV Broth 및 novobiocin이 첨가된 RV Broth가 저오염 및 중오염의 검체에서 salmonellae의 검출 및 계수에 최선이었다⁹.

다른 연구에서¹⁰, RV Broth는 인공적으로 오염된 fluid whole milk에서 salmonellae를 검출하는 데 tetrathionate-brilliant green broth보다 더 우수한 것으로 알려졌다.

RV Broth에서 증균 배양에 사용되는 접종량의 크기가 선택성을 방해하지 않을 정도로 충분히 작다는 것이 중요하다. 접종량/액체배지의 비율은 1:100에서 1:2,000 사이가 제안되고 있다¹².

저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지: 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용

조제배지: 2~8°C에 보관

성상 (Appearance)

분말배지 : 창백한 녹색의 유동성 분말

조제배지 : 파란색 용액

품질관리(Quality Control)