Violet Red Bile Glucose Agar - CM0485

조성(Typical Formulation)

조제 (Directions)

1리터의 정제수에 38.5g을 현탁하고 끓인다. 끓은 후 2분간 또는 완전히 녹는데 필요한 시간까지 끓인다. 완전히 녹인다. 녹지 않은 agar의 작은 덩어리가 없도록 한다. 추가적인 멸균이 필요없다. 잘 혼합 후 시험관이나 페트리접시에 분주한다. 

사용(Technique)

일련의 검체 희석액을 준비하여 최소한 1개가 1ml 분주액으로부터 100~200개 집락을 형성할 수 있도록 포함시켜야 한다. 각 희석액에서 1ml을 취하여 희석당 2개의 9cm 페트리접시에 넣는다. 47°C로 식힌 15ml의 배지를 첨가하고 시계방향으로 3회 반시계방향으로 3회 가볍게 돌린다. 배지가 응고되면 같은 배지 10ml을 붓고 응고되게 한다(한천 오버레이). 페트리접시를 거꾸로 하여 회복시켜야 할 Enterobacteraceae 그룹에 따라서 >42°C에서 18시간동안, 32°C에서 24~48시간 동안 또는 4°C에서 10일간 배양한다.

한천 오버레이는 비 발효성 그람 음성 세균의 성장을 억제하는 혐기성 조건을 만들어 주며, bile 침전의 보라색-분홍색 환에 의해 둘러싸인, 선명한 보라색 집락의 형성을 좋게 해주는 glucose의 발효를 촉진시킨다.

주의사항(Precautions)

본 배지는 Enterobacteriaceae에 대해서 완전히 특이적인 것이 아니다, 다른 미생물들, 예를 들면 Aeromonas도 자랄 수 있다. 이 배지의 선택적 활성은 24시간 배양 후에 감소되고 이전에 억제되었던 미생물들이 성장할 수 도 있다. 붓기 평판법을 사용하는 배지는 신선하게 만들어서 47°C까지 식힌 후 3시간 이내로 사용한다.

설명(Description)

분변 오염의 가능한 지표로서 대장균(coli-aerogenes)을 검출하기 위해 물에 적용하였던 시험의 결과는 날 식품(raw food)에 적용했을 때 중요성이 아주 덜하다. 식료품 시험에서, 더 정의된 생물군이면서 glucose를 발효시켜 산 그리고/또는 기체를 생성하는 Enterobacteriaceae의 검출이 권장된다^1,2. 대장균군에 추가하여 이 그룹에는 lactose를 발효하지 못하는 salmonellae 및 shigellae, 그리고 장독소생성 Escherichia coli가 포함된다. 또한 Klebsiella 및 Citrobacter도 포함되며 이들은 대장균군보다 더 열에 저항적이며 따라서 최소의 열을 사용하는 공정의 실패를 잘 나타내는 지표생물이다.

식료품의 총 Enterobacteriaceae 함량을 측정하기 어려운 점이 Mossel 등³에 의해 연구되었다. 이 연구자들에 의하면 대장균군을 검출하는 기존의 배지에 glucose를 첨가하면 성능이 향상된다는 것이 보고되었다. 그들은 Crystal violet neutral red bile lactose agar (Violet Red Bile Agar, CM0107)에 리터당 10g의 glucose를 첨가하고 MacConkey Glucose Agar의 변형 조성으로 이름 지었다.

Mossel 등^4,5에 의한 추가연구에서 lactose가 생략되어 최종적으로 Violet Red Bile Glucose Agar의 조성이 되었다. Lactose를 계속 포함시키는 것이 더 정확한 동정을 이끄는 시험 결과를 제공하지 못했다. Lactose를 배제하여 배지가 더 경제적으로 되어 리터당 사용되는 양도 감소되었다.

Bile salts를 포함하는 배지는 Enterobacteriaceae에, 스트레스 상황하에 있지 않은 세포에 대해서도, 고유 독성을 가지고 있다^{6,7,8,9,10,11}.

Enterobacteriaceae의 생산성 관점 및 대사 강도면에서¹², Violet Red Bile Agar의 6개 상용 제품들내에서^4,5 상당한 차이가 관찰되었다. 옥소이드와 함께 그 배지의 구성요소들이 시험되었고 Mossel은 다음의 규격을 작성하였다:

1. 승인된 배지는 투명해야 하며 만족스런 크기의 집락이 나타나야 한다. Enterobacteriaceae의 전형적인 집락의 수가 재현되어야 한다.

2. Yersinia enterocolitica (Serotype 03)의 균주를 민감성 지표생물로 사용하여 혐기성 대사 시험에 의한 고유 독성을 시험했을 때, 배지는 적절한 성장, 산 생성, 그리고 필요시 적절한 기체 생성을 촉진해야 한다.

3. 배지는 전형적인 집락의 확정율 (즉, Enterobacteriaceae로 확정된 집락의 수를 시험 결과로 나온 집락의 수로 나눈 것)을 만족해야 한다.

Violet Red Bile Glucose Agar는 이 모든 기준을 만족시키도록 개발되었다.

VRBGA (CM0485)은 ISO11133:2014와 상응한다¹⁵.

저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지: 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용

조제배지: 2~8°C에 보관. 가능하면 신선하게 조제해서 사용.

성상 (Appearance)

분말배지 : 짚색-분홍색의 유동성 분말

조제배지 : 보라색 젤

집락 성상 (Characteristic appearance of colonies)

둥근, 보라색-분홍색의 직경 1-2mm 집락. 보라색 환을 둘러싸임.

집락 크기는 일반적으로 1-2mm이지만 크기는 여러 요소에 영향을 받을 수 있다. 모든 보라색-분홍색 집락을 계수해야한다. 추가 시험을 통해 이런 집락들을 확정적으로 동정해야 한다.

품질관리(Quality Control)